Doel van dit project: De uitkomsten van dit project zal ons mogelijk in staat stellen om aanvullende nieuwe therapeutische middelen te ontdekken doelen tegen glioblastomen.
Bijdrage Stichting STOPhersentumoren: ā¬ 74.518,- euro (waarvan ā¬ 7.500,- van stichting B.) per 27 december 2020
Celproliferatie is in de meeste gedifferentieerde cellen beperkt tot enkele celcycli. Mutaties van de DNA - dat deze basisregulatie van celproliferatie zou kunnen veranderen - wordt normaal gesproken gerepareerd door een complexe intracellulaire sensor / effector-machines. Bij een overbelasting van deze reparatie mechanismen worden bereikt, ondergaan cellen veroudering (een permanente stilstand van celproliferatie) of zelfs geprogrammeerde celdood (apoptose, necroptose). Als alternatief kunnen mutante cellen zijn herkend en geƫlimineerd door het immuunsysteem. Glioblastoom, de overheersende en meest agressieve vorm van hersenkanker, vertoont veranderingen van al deze mechanismen, en zelfs om de immuunherkenning en veroudering naar hun voordeel. Als gevolg hiervan blijven ze tot op heden ongeneeslijk. We hebben bijgedragen om aan te tonen dat een hyperactivering van de NF-kB-familie van transcriptie factoren is een belangrijke oorzaak van de resistentie van glioblastoom tegen celdood en cytotoxisch behandelingen. Deze hyperactivering komt voort uit afwijkende tyrosine-, interleukine- en TLR-receptoren activering aan het oppervlak van tumorcellen, evenals van defecten (door genetische deletie) van hun fysiologische remmers tijdens carcinogenese. Met steun van Stichting Stop Hersentumoren hebben wij geconstateerd dat een lid van de NF-kB superfamilie, IkBzeta (gecodeerd door het gen NFKBIZ), wordt significant tot overexpressie gebracht in glioblastomen, en voorkomt geprogrammeerde celdood in deze tumoren .
Onze strategie is gebaseerd op een volledig diervrije experimentele opzet. We hebben inderdaad in samenwerking met de laboratoria van Glia Biology (Prof E Hol, UMCU), Translationeel Neurowetenschappen (Prof J Pasterkamp, āāUMCU) en 3D-microscopische tumorbeeldvorming (Dr A Rios, PMC), creĆ«erden nieuwe syngene modellen van menselijke glioblastomen die de tumor recapituleren micro-omgeving en immuuninfiltraat. Deze syngene ,. patiĆ«nt-afgeleide modellen bestaan āāuit IPSC-gebaseerde hersenorganoĆÆden (gemaakt van fibroblasten van de patiĆ«nt), waarin primaire tumorcellen worden geĆÆmplanteerd, samen met lymfocyten, microgliacellen en NK-cellen van dezelfde patiĆ«nt. Deze cellen zijn geĆÆsoleerd vormen direct de tumormonsters, geselecteerd per subgroep, in vitro geamplificeerd en opgeslagen als nodig zijn.tu.
Doel van dit project:
1. We zullen eerst het effect van NFKBIZ-remming (gemedieerd door sh-RNA) op de fenotype van NK-, APC- en Treg-lymfocyten (FoxP3 + Helios +), in co-cultuur met de syngene tumorcellen Ć©Ć©n voor Ć©Ć©n in vitro, met behulp van gerichte RNA-expressieanalyse (qRTPCR panelen), signalering pathway activering (reportergenen en WB) cytotoxische / functionele tests (bv. afgifte van granzyme, apoptose,ā¦) en oppervlakte / nucleair marker uitdrukking. 2. Onze unieke menselijke, syngene hersenorganoĆÆde modellen zullen ons dan toelaten om de invloed van NFKBIZ-remming (met behulp van retrovirale sh-RNA-vectoren) op de tumorcellen en hun immuunsysteem infiltreert, wanneer ze weer worden verenigd in het natuurlijke menselijke brein omgeving, met name gebruikmakend van bifotonmicroscopie en eencellige RNA-expressie analyse. 3. Bovendien is de rol van de nieuwe partners van ikBzeta die we hebben gevonden (cf primary resultaten) in de immunomodulerende effecten van deze transcriptiefactor zullen worden geanalyseerd door gerichte inactivering van genoemde partners, Ć©Ć©n voor Ć©Ć©n, gevolgd door gelijkaardige analyses als beschreven.
Eindresultaat:
De uitkomsten van dit project zal ons mogelijk in staat stellen om aanvullende nieuwe therapeutische middelen te ontdekken doelen tegen glioblastomen.
